Hoffman Modulation Contrast Microscopy
Differential Interference Contrast Microscopy(DIC)
Georges (Jerzy) Nomarski (January 6, 1919 – 1997)
프랑스 귀화 물리학자 (폴란드 태생)
이 관찰법은 샘플이 두꺼운 경우에 후광에 의한 광학 노이즈가 발현되는 위상차 현미경과 다르게 후광 효과가 발현되지 않으며, 샘플에 입체감을 부여하여 투명한 샘플에 대하여 보다 세밀한 관찰을 가능하게 합니다.
이 관찰법은 살아있는 생물학적 시료 및 염색을 하지 않은 조직의 관찰에 폭넓게 사용되고 있습니다.
본 관찰법은 편광필터 2개(편광자, 검광자)와 DIC 프리즘 2개의 추가 유닛으로 구성되어 진다.
가장 바깥쪽에 위치하는 편광 필터 2개(편광자,검광자)는 Cross Nichole 상태로 설치 되어 있어야 하며, 이는 두개의 유닛 사이에 광학적 특성의 변화가 있는 빛만을 통과시키겠다는 목적으로 이해하면 된다.
편광자를 통과한 빛이 처음 프리즘에 통과하면 빛은 2개의 경로를 가지게 된다. 이 두 빛은 광학진동 방향이 직교하며, 매우 미소한 거리 차를 가지고 진행한다.
샘플을 통과하고 다음 프리즘을 통과하면서 빛은 다시 동일한 경로를 갖는 빛으로 합성되며, 이때 다른 경로를 통과하였기 때문에 동일한 위상을 갖지 못하는 경우가 발생한다.
동일한 위상일 경우에는 보강간섭 그렇지 않는 경우에는 소멸간섭이 발생한다.
별칭 : Normaski Interference Contrast Microscopy ( NIC )
형광 현미경 샘플 이미지 ( by J.H.JIN )
형광은 특정 파장의 빛을 흡수하는 동시에 다른 파장(흡수 파장보다 긴 파장), 작은 에너지의 빛을 반사하는 분자현상입니다. 이 과정은 excitation(여기) 와 emission(방출, 발광) 으로 알려져 있습니다.
유기 및 비유기의 많은 물질들은 형광 특성을 가지고 있습니다. 형광 현미경을 사용하는 초기의 현미경 학자들은 1차 형광 또는 자가 형광을 주로 보았으나, 지금은 매우 밝은 형광을 가지는 많은 염료(fluorochrome)가 개발되었고 이는 시편의 특정 부분을 염색하는데 사용이 됩니다. 이러한 방법은 2차 혹은 간접 형광이라고 합니다.
이러한 염료는 형광색소(Fluorochrome) 라고 하는데, 항체와 핵산과 같은 다른 유기 합성 물질을 결합할 때는 fluorescent probes 혹은 fluorophores로 불려집니다. (하지만, 일반적으로 이러한 용어들은 종종 같은 의미로 사용되어 지고 있습니다. )
형광 현미경 ( 좌 ) 과 명시야 현미경 ( 우 ) 의 광로 비교
Simple Polarization
본 관찰법은 편광필터 2개(편광자, 검광자)로 이루어진다.
상기 이미지와 같이 편광자와 검광자가 90도 각도로 설치 되어 있는 상태를 흔히 직교니콜(Cross Nicol)이라고 불리면, 현미경에서의 주요 사용 목적은 광학적 특성의 변화가 있는 빛만을 통과시키고자 할 때 자주 사용된다.
일반적으로 빛은 모든 방향으로 진동하는 특성을 가지고 있으나, 세로 방향 편광자(좌측필터)를 통한 빛은 세로로 진동하는 빛만이 통과하게 되고, 우측 필터(검광자)는 세로 편광을 차단하는 역할을 하기 때문에 실제로 우측으로 투과되는 빛은 없다.
간이 편광 현미경에서는 편광자와 검광자의 사이에 샘플이 위치하게 되며, 샘플 재질이 등방체 특성을 가지고 있는 경우에는 샘플 만으로는 광학적 특성에 변화를 줄 수 없기 때문에 접안렌즈나 현미경 카메라 측에서 관찰 할 수 없는 어두운 이미지가 나오는 것이 일반적이다.
참고로 등방체가 아닌 물질인 플라스틱은 편광자를 통과하여 얻은 편광된 빛에 큰 영향을 주기 때문에 이를 염두에 두고 사용하여야 한다. 예를 들어, 미분간섭 관찰에서 광학 경로 상에 플라스틱과 같은 재질이 있으면, 미분간섭 관찰을 위한 광학 설계를 무의미하게 만들어 버린다.
Bright Field Microscopy
Bright Field 관찰법은 현미경 관찰의 시작이라고 할 수 있습니다. 샘플을 확대하는 등의 여러 발명은 아주 오랜 전 부터 기록을 볼 수 있었으며, 1590년대의 네덜란드인 얀센 (Zacharias Jansen)이 현재의 현미경과 같은 구조의 현미경을 제작하였고, 그 이후로 현대에 이르기까지 다양한 관찰법의 시작점으로 사용되어 지고 있습니다.
필요에 따라서 반사와 투과 조명을 동시에 사용하는 경우도 있음.
샘플을 단순 확대 관찰 용도이며, 특수한 광학유닛을 필요로 하지 않는 기본 관찰 방법입니다. 현미경에서 사용되는 조명계는 과거에는 Critical illumination을 사용하였으나, 현재에 판매되는 대부분의 현미경의 조명계는 쾰러 일루미네이션(Köhler illumination )을 사용하고 있습니다.
조명에 의해 만들어 지는 결상계와 샘플에 의해 만들어지는 결상계가 서로 영향을 미치지 않도록 설계되어 있으며, 조명의 결상에 의해 발생하는 샘플의 이미지 저하를 최소화 한 조명계입니다.
critical illumination : 예전에 사용하였던 조명 방법으로 조명의 결상계과 샘플의 결상계가 서로 중복 결상되도록 되어 있어서, 샘플의 관찰을 할 때 조명의 상과 샘플의 상이 중복되어 관찰되어 이미지의 저하가 발생합니다.
가시광선 대역에 있어서 파장이 짧은 보라색의 빛과 파장이 긴 붉은색의 빛의 굴절율을 보면 파장이 짧을 수록 렌즈를 통과한 후의 굴절율이 크고, 파장이 길수록 굴절율이 작아지기 때문에 하나의 렌즈로 빛을 결상하고자 할때 파장에 따라 결상 위치에 차이를 발생하게 됩니다. 일반적으로 현미경에서 사용되는 대물렌즈는 이러한 색수차에 의한 문제점을 보정 하는 정도로 다음과 같이 대물렌즈의 등급을 분류하고 있습니다.
Download Catalog JNO-DPTS
To observe Fluorescence image and IR DIC image at the same time
with Multi-Dual Port tube for BX51-WI
(Made by Jae Hwan JIN )
CA3 pyramidal neuron, IR-DIC & Alexa Fluor 488 (50 uM)
| Frame Rate | 162 fps, increased through ROI |
| Sensor | 1 / 1.2 inch ( 1920×1200, 5.86㎛ x 5.86㎛ ) |
| FILTER | JNO-RemN/B (Noisy cut filter) |
| Manification | 1x, 1.25x, 1.6x, 2x |
Advance Realtime Monitor. Easy-to-Use, Image Enhancement, etc
ARM is image analysis software for JNOPTIC AcquCAM cameras. This S/W is interchangeable with all WDM cameras regardless of camera brand and model and even more the most strength point is simple and easy use of length, area, angle, etc.
Improvement Function about Microscopy Image Monochrome. (Used function: Auto Level)
Effective improvement of image with simple operation. This image is shot by JNOPTIC Pro/S3 camera
Improvement Function about Microscopy Image. (Used function: Auto Level)
Effective improvement of image with simple operation. These images are shot by JNOPTIC AcquCAM Pro/G3 camera
| Responding Model | Measurement value unit | Measurable height | Error of measuring 1000㎛ | Recommended measuring height |
| CX 41 | 0.2 ㎛ | -9.9 ~ 29.9㎜ | Below ±20㎛ | Below ± 2000㎛ |
| CKX 41 | 0.2 ㎛ | -9.9 ~ 29.9㎜ | Below ±20㎛ | Below ± 2000㎛ |
| BX – FM | 0.2 ㎛ | -9.9 ~ 29.9㎜ | Below ±20㎛ | Below ± 2000㎛ |
| BX 51/53 | 0.1 ㎛ | -9.9 ~ 29.9㎜ | Below ±10㎛ | Below ± 1000㎛ |
| MX 51 | 0.1 ㎛ | -9.9 ~ 29.9㎜ | Below ±10㎛ | Below ± 1000㎛ |
| MX 61L/61 | 0.1 ㎛ | -9.9 ~ 29.9㎜ | Below ±10㎛ | Below ± 1000㎛ |
JNOPTIC Image Analysis Software OpTIC Eye Series
기본측정+오토카운팅(입도분석용)+금속조직분석용
– 형상측정(상분율측정)
: 두가지 이상의 색상을 추출하여 면적율 계산
– 그레인사이즈(Grain Size Analysis)
: ASTM E 1382에 의한 금속표면의 결정립도 산출
: 교차점 / 면적 / 수동면적 추출방식
– 구상화율 분석(Nodular-graphite analysis)
: ASTM, ISO, JIS 규격에 따라 분석이 가능
– 비금속 개재물(Non-Metallic Inclusion)
: 산화물, 규산물, 황화물, 내화물, 광재등 추출
영상분석에 의한 구상화율 측정 (nodular-graphite analysis)
주철분석 소프트웨어 모듈로 ASTM, JIS, KS 규격에 따라 구상흑연주철의 구상흑연에 대하여 현미경영상분석을 통해 구상화율을 측정하고 결과를 표시합니다.
영상분석에 의한 결정도립 측정 (rain Size Analysis)
JNOPTIC Image Analysis Software OpTIC Eye Series
기본측정+보고서+오토카운팅(입도분석용)
– 셀이미지 자동측정(5단계 easy측정)
: 영상분할, 측정항목설정, 측정, 분류, 성적서기능
– 면적, 면적비, 반경, 직경등 15개 항목 자동측정
Auto Counting
영상을 자동 분석하는 기능입니다. 영상을 개체들(Objects)과 배경(Background)으로 분할(Segmentation)함 으로써 측정할 영역을 한번에 검출해내고, 면적 등을 자동측정 합니다. Auto Count는 위의 차례대로 측정이 이루어 집니다.
측정 항목 설정(Define Measure)
측정결과를 분석/분류 (Classification)
View Measurement를 통한 실시간 측정 항목 display 측정
크기별로 그룹화(Classification), 그룹별 색상화 가능
Report
측정결과를 4가지 형태의 Chart로 표시: Histogram, Line graph, Pie, Scatter-gram Excel 전송 가능
